Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. PrøveSamling:Prøven skal samles i sterile rør i samsvar

med standard tekniske spesifikasjoner.

2. Reagenspreparering (reagensprepareringsområde)

Ta ut komponentene i settet, balanser dem ved romtemperatur for standby-bruk.

3. Prøvebehandling (prøvebehandlingsområde)

3.1 Nukleinsyreekstraksjon

Det anbefales å ta 200 μL væskeprøver, positiv kontroll og negativ kontroll for nukleinsyreekstraksjon, i henhold til de tilsvarende kravene og prosedyrene for virale DNA-ekstraksjonssett.

3.2 Lyofilisert pulveroppløsning og maltilsetning

Forbered Monkeypox Virus Lyofilisert premix i henhold til antall prøver.Én prøve trenger ett PCR-rør som inneholder lyofilisert forblandingspulver.Negativ kontroll og positiv kontroll bør behandles som to prøver.

(1) Tilsett 15 μL oppløsningsløsning i hvert PCR-rør som inneholder lyofilisert forblanding, og tilsett deretter 5 μL ekstraherte prøver/negativ kontroll/positiv kontroll i hvert PCR-rør.

(2) Dekk PCR-rørene godt, knip PCR-rørene for hånd til lyofilisert pulver er fullstendig oppløst og blandet, samle væsken til bunnen av PCR-rørene ved øyeblikkelig lavhastighetssentrifugering.

(3) Hvis du bruker vanlig sanntids PCR-instrument for deteksjon, overfører du PCR-rør direkte til amplifikasjonsområdet;hvis du bruker BTK-8 for deteksjon, må du utføre følgende operasjoner: Overfør 10 μL væske fra PCR-røret til reaksjonsbrikkebrønnen til BTK-8.Ett PCR-rør tilsvarer én brønn på brikken.Under pipettering, sørg for at pipetten er 90 grader vertikal.Aerosolbarrierepipettespissene skal plasseres i midten av brønnen med moderat kraft og slutte å skyve pipetten når den når det første giret (for å unngå bobler).Etter at brønnene er fylt, ta ut en reaksjonsbrikkemembran for å dekke alle brønnene, og brikken overføres deretter til amplifikasjonsdeteksjonsområdet.

4. PCR-amplifikasjon (deteksjonsområde)

4.1 Sett PCR-rørene/reaksjonsbrikken inn i reaksjonstanken og sett navnene på hver reaksjonsbrønn i tilsvarende rekkefølge.

4.2 Innstillinger for deteksjonsfluorescens: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) Internkontroll (CY5).

4.3 Kjør følgende sykkelprotokoll

Protokoll for ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protokoll for BTK-8:

5. Resultatanalyse (se instrumentbrukerhåndboken）

Etter reaksjonen vil resultatene lagres automatisk.Klikk "Analyser" for å analysere, og instrumentet vil automatisk tolke Ct-verdier for hver prøve i resultatkolonnen.De negative og positive kontrollresultatene skal samsvare med følgende "6. Kvalitetskontroll".

6. Kvalitetskontroll

6.1 Negativ kontroll: Ingen Ct eller Ct>40 i FAM-kanal, Ct≤40 i CY5-kanal med normal forsterkningskurve.

6.2 Positiv kontroll: Ct≤35 i FAM-kanal med normal amplifikasjonskurve, Ct≤40 i CY5-kanal med normal amplifikasjonskurve.

6.3 Resultatet er gyldig dersom alle kriteriene ovenfor er oppfylt.Ellers er resultatet ugyldig.

Resultattolkning

Følgende resultater er mulige:

MERK: Hvis ugyldig resultat oppstår, må prøven samles inn og testes på nytt.